产品货号：
YTB4300
中文名称：
通用型miRNA克隆接头(5'腺苷化、3'封闭)
英文名称：
Universal miRNA Cloning Linker(5'adenylated, 3'blocked)
产品规格：
1μg|5μg
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是一种常用于miRNA等3′端为羟基的RNA或3′端为羟基的单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时，在3′端添加的接头。
本产品5′端腺苷酰化(也称5′端预腺苷酰化或5′端预腺苷化，5′pre-adenylated或5′pre-adenylation)，3′端氨基封闭，可以用于3′端为羟基的RNA的3′端接头的添加。RNA连接酶可以识别“活化”的5′端腺苷酰化的本产品，在无需ATP存在的条件下，可将本产品的5′端与另外一条单链寡核苷酸的3′端羟基共价连接。利用5′端腺苷酰化，3′端封闭的本产品，加入RNA连接酶，在无需添加ATP的条件下，就能实现本产品5’端和目标序列3’羟基的特异性共价连接。例如和miRNA连接时，可以有效避免miRNA的自连、不同miRNA之间的连接、本产品的自连或本产品不同链之间的连接，而仅发生本产品5′端和miRNA 3′羟基之间的特异性连接。
本产品的1μg小包装约通常可以进行8～17次连接反应，5μg中包装约通常可以进行40～85次连接反应。具体的连接反应次数和反应体系的体积和本产品的用量有关。
使用效果：
本产品的电泳图和连接效果图请参考图1。图中可见，本产品条带清晰，纯度高，与5’端为磷酸化的序列相比有显著的电泳迁移率差异(图1A)；并且本产品使用T4 RNA ligase II(截短型，货号：YTB4028)与ssRNA连接时，连接效率非常高(图1B)。
图1.Universal miRNA Cloning Linker Linker (5′腺苷化3′封闭)及其连接效果图图。图A.本产品5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (AppDNA)与5′-pCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (pDNA)的电泳对比图。图B.本产品(AppDNA)与ssRNA使用T4 RNA ligase II(截短型，货号：YTB4028)的连接效果图。图中可见本产品与ssRNA有非常高的连接效率。
技术指标：
序列：5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT-NH2-3′
浓度：水溶液，浓度为40ng/μL，即6.9μM。
用途：可以应用于小RNA克隆、miRNA文库构建。
保存：-20℃保存，一年有效。-80℃保存，至少一年有效。
使用说明：
相关搜索：通用型miRNA克隆接头(5'腺苷化、3'封闭)，通用miRNA克隆接头，通用miRNA克隆连接头
本产品5′端腺苷酰化(也称5′端预腺苷酰化或5′端预腺苷化，5′pre-adenylated或5′pre-adenylation)，3′端氨基封闭，可以用于3′端为羟基的RNA的3′端接头的添加。RNA连接酶可以识别“活化”的5′端腺苷酰化的本产品，在无需ATP存在的条件下，可将本产品的5′端与另外一条单链寡核苷酸的3′端羟基共价连接。利用5′端腺苷酰化，3′端封闭的本产品，加入RNA连接酶，在无需添加ATP的条件下，就能实现本产品5’端和目标序列3’羟基的特异性共价连接。例如和miRNA连接时，可以有效避免miRNA的自连、不同miRNA之间的连接、本产品的自连或本产品不同链之间的连接，而仅发生本产品5′端和miRNA 3′羟基之间的特异性连接。
本产品的1μg小包装约通常可以进行8～17次连接反应，5μg中包装约通常可以进行40～85次连接反应。具体的连接反应次数和反应体系的体积和本产品的用量有关。
使用效果：
本产品的电泳图和连接效果图请参考图1。图中可见，本产品条带清晰，纯度高，与5’端为磷酸化的序列相比有显著的电泳迁移率差异(图1A)；并且本产品使用T4 RNA ligase II(截短型，货号：YTB4028)与ssRNA连接时，连接效率非常高(图1B)。
图1.Universal miRNA Cloning Linker Linker (5′腺苷化3′封闭)及其连接效果图图。图A.本产品5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (AppDNA)与5′-pCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3′ (pDNA)的电泳对比图。图B.本产品(AppDNA)与ssRNA使用T4 RNA ligase II(截短型，货号：YTB4028)的连接效果图。图中可见本产品与ssRNA有非常高的连接效率。
技术指标：
序列：5′-rAppCTGTAGGCACCATCAAT-NH2-3′
浓度：水溶液，浓度为40ng/μL，即6.9μM。
用途：可以应用于小RNA克隆、miRNA文库构建。
保存：-20℃保存，一年有效。-80℃保存，至少一年有效。
使用说明：
- 使用本产品与ssRNA的3’羟基末端连接推荐使用T4 RNA ligase II(截短型，货号：YTB4028)。
- 参考下表在冰浴中配制如下反应体系：
成分 用量 终浓度 ssRNA xμl 0.5μM DEPC-treated Water (1.1 or 2.55)-xμl - Universal miRNA Cloning Linker (6.9pmol/μl) 2.9 or 1.45μl 1 or 0.5μM PEG8000 (50%,RNase Free) 12μl 0.3 10X Reaction Buffer 2μl 1 X RNase Inhibitor (40U/μl) 1μl 2U/μl T4 RNA ligase II
(截短型，200U/μl，货号：YTB4028)1μl 10U/μl Total Volume 20μl -
注意：- 由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DECP处理去除RNase或者确保是RNase free的。推荐在连接体系中添加RNase Inhibitor，以避免ssRNA或其连接产物的降解，尽管经测试我们发现在严格操作的情况下，不加RNase Inhibitor也不会导致ssRNA或其连接产物发生明显降解。
- 进行连接反应时，如果样品RNA比较珍贵，希望充分被连接，可以按照接头和样品RNA的摩尔比为2:1的比例进行连接；如果样品RNA比较充裕，同时感觉本产品的成本偏高时，可以按照接头和样品RNA的摩尔比摩尔比1:1甚至1:2的比例进行连接反应，这样可以很好地节省本产品。
- 如果同时进行多个连接反应，可以把上表中除ssRNA之外的所有溶液和酶提前预混合，然后再分装到各反应管内。
- 由于涉及RNA操作，需要严格按照RNA操作的规范进行，避免RNase污染，相关试剂和耗材需要经过DECP处理去除RNase或者确保是RNase free的。推荐在连接体系中添加RNase Inhibitor，以避免ssRNA或其连接产物的降解，尽管经测试我们发现在严格操作的情况下，不加RNase Inhibitor也不会导致ssRNA或其连接产物发生明显降解。
- 连接反应：25℃，孵育60min。为了使连接反应更加充分，可以适当延长连接反应时间。
- 终止反应：65℃，孵育15min。
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